准备细胞

1. 待冷冻细胞配制成细胞悬液（机械法或酶法解离）。

2. 细胞悬液离心获得沉淀。

3. 去除上清液-注意：尽可能多地移除清洗液，以降低冻存液被稀释程度。

细胞冻存

1. 加入预冷的（2-8°C）冻存液。

     a. 细胞密度：细胞密度按照常规细胞培养方案0.5-30×10⁶细胞/mL(可以更高)。

     b. 冻存液已经混合了DMSO，不需要再添加其他任何冻存剂。

2. 预冷：细胞/冻存液混合悬液2-8°C孵育约10分钟。

3. 程序降温：

     a. 如使用程序降温盒则应将冻存的细胞悬液置于提前预冷至2-8°C的降温盒中，再将程序降温盒置于-80°C冰箱中，24h后移入液氮罐(低于-130°C)长期保存。

     b. 如使用程序降温仪对冻存的细胞悬液进行-1°C/min进行降温至-100℃后，应立即置于液氮罐(低于-130°C)中长期保存。

     c. 冻存后的样品应在液氮罐(低于-130°C)中长期保存，如若放置于-80°C冰箱，仅建议短期储存(数周至数月)。

样品解冻

1. 解冻复苏：在37°C水浴或同类似的机械解冻装置中快速解冻样品。

      a. 样品解冻时应轻轻地旋转样品，直到所有可见的冰都融化。1mL冻存样本解冻时间大约2-3分钟。

      b. 不允许样品在冷冻温度(0-10°C)以上加热。水浴中拿出来时，冻存管触感是冷的。不推荐被动解冻。

 2. 立即用培养基或等效等渗介质稀释细胞/冷冻液混合物。

      a. 稀释程序可以在一个步骤中完成。

      b. 稀释介质温度应在20°C到 37°C之间。

      c. 建议稀释比为1:10(样品与介质)或更大。

3. 合适的条件下培养细胞或立即使用细胞。

注意事项：

1. 冻存液已经混合了DMSO，不需要再添加其他任何冻存剂；

2. 冻存液使用前需预冷（2-8℃）；

3. 细胞冻存需梯度降温。