一、产品概述
HELIOS 人血小板裂解物-PURE（细胞培养级）是一款经过严格工艺处理的高质量细胞培养添加剂，源自健康人血小板，通过可控的裂解过程释放血小板中丰富的生长因子、细胞因子、黏附蛋白及其他营养成分。本产品旨在为多种哺乳动物细胞（尤其是间充质干细胞、内皮细胞、上皮细胞等原代细胞及干细胞）的体外培养提供优异的营养支持，有效替代传统胎牛血清（FBS），降低异种蛋白污染风险，提高细胞培养的安全性和一致性。

二、产品特性
?无动物成分/血清替代品
?用5%的UltraGRO1M-PURE替代高达20%的胎牛血清
?在原代分离和扩增培养中性能更好
?缩短种群倍增时间（20~30小时）
?低成本的低成本选择产生
?没有粘附因子需要
?Lot到批次一致性
?不需要肝素

三、产品的性能展示
1.缩短hMSCs的倍增时间和提高增殖能力

图1：UltraGROTM-PURE对人间充质干细胞生长的性能。(A)将UltraGRO“M-PURE培养的人骨髓间充质干细胞（hBM-MSCs）与人血小板裂解物供应商a的倍增时间和(B)累积数量翻倍。两种培养基补充剂与基础培养基的浓度为5%。(N=3)
2.保持多谱系分化的潜力

图2：在UltraGRO-PURE中培养的来自骨髓（BM）、脂肪组织（AD）和脐带（UC）的人间充质干细胞的特征。(A)细胞形态在5.100倍放大时呈纺锤形形态。(B)人骨髓间充质干细胞随后可分化为成骨细胞（茜素红染色），200倍放大；(C)脂肪细胞（油红O染色），200倍放大；(D)软骨细胞（阿利新蓝染色），100倍放大。
3.用5% UltraGROTM-PURE替代20%胎牛血清

图3：UltraGROTM-PURE对来自骨髓（BM）、脂肪组织（AD）和脐带（UC）生长的人间充质干细胞的性能。(A)20%定义的胎牛血清培养或(B)UltraGROTM-PURE培养的人间充质干细胞5代的平均倍增时间。(C)UltraGROTM-PURE培养的hBM-MSCs、(D) hAD-MSCs和(E)hUC-MSCs的累积数量加倍与UltraGROTM-Adv相当，作为纤维蛋白原耗尽的hPL产物的参考。(N=3)
4.维持细胞表面表型

图4：在UltraGROTM-PURE中培养5代的人BM-、AD-和UC-MSC显示了MSC表面标记物的特征性表达。UltraGROTM-Adv.is作为纤维蛋白原缺失hPL产物的参考。

四、质量控制标准
1.外观：黄色至浅黄色液体
2.总蛋白：4.0 - 8.0 g/dL
3.内毒素:≤ 10 EU/mL
4.无菌性：通过
5.支原体：阴性。
6.pH：测试。
7.渗透压：测试。
8.性能测试：测试和记录

五、适用范围
用于人类体外组织和细胞培养加工应用。

六、重要信息
1.不溶性颗粒可能会在解冻的 UltraGRO 中形成™-纯正。已发表的研究表明，颗粒不会改变产品的性能。
2.不溶性颗粒可能会在解冻的 UltraGRO 中形成™-PURE，建议在3,400 xg下离心3~5分钟。
3.在 UltraGRO 之后过滤完成介质（例如 5%）™-PURE在基础介质中稀释，不会影响UltraGRO™-PURE补充细胞培养性能。然而，0.22微米过滤不推荐用于 UltraGRO™-纯净浓缩物，因为这可能会减少5%的UltraGRO™-纯细胞培养性能。
4.应避免反复的冻融循环，因为它们会导致不可溶性沉淀物的增加，从而导致 UltraGRO 的潜在减少™-纯粹的表演。

七、MSC培养条件
1.媒体：完全培养基由基础培养基(例如α-MEM或其他支持性培养基)和UltraGRO-PURE组成。
2.培养类型：粘附
3.培养容器：细胞培养板、T型瓶、G-Rex培养瓶、细胞培养袋、旋转瓶或垂直轮式生物反应器温度范围：36℃至38℃
4.培养箱环境：湿度为4~6%的CO加湿环境，确保培养容器中实现适当的气体交换。

八、使用说明
1. UltraGRO™-PURE在典型的细胞培养介质中，即含有2mM L-谷氨酰胺的最终浓缩物的α-MEM中，以5%（v/v）的浓度显示MSC的******生长。
2. 我们建议将MSCs的接种量控制在每平方厘米约3×103~ 6×103个细胞。
3.UltraGRO™-PURE已经被纤维蛋白原耗尽，并且在细胞培养液中不需要添加肝素。

九、准备工作
1.试剂解冻：将HELIOS人血小板裂解物-PURE从-20℃或-80℃冰箱中取出，置于2-8℃冰箱中缓慢解冻（建议过夜解冻），或在室温下快速解冻（需不断轻轻混匀）。解冻过程中避免剧烈震荡。
2.基础培养基准备：准备适合目标细胞培养的基础培养基（如DMEM、MEM、α-MEM、RPMI-1640等），并根据需要添加谷氨酰胺、抗生素（如青霉素/链霉素）等常规添加剂（注意：部分敏感细胞系可能对某些抗生素敏感，需根据情况调整）。
3.无菌操作环境：在超净工作台内进行所有操作，确保无菌环境，避免污染。

十、培养基配制步骤
1.确定添加比例：根据目标细胞类型及培养经验，确定HELIOS人血小板裂解物-PURE在完全培养基中的******添加体积百分比。通常推荐添加比例为5%-15%（v/v），具体比例需用户根据细胞特性进行预实验优化（建议设置不同浓度梯度，如5%、10%、15%等，评估细胞增殖、形态等指标以确定******浓度）。
2.混合均匀：在无菌条件下，将计算好体积的HELIOS人血小板裂解物-PURE缓慢加入到预热或室温的基础培养基中，边加边轻轻混匀，避免产生气泡。
3.分装与储存：配制好的完全培养基可分装保存于2-8℃冰箱中，建议在1-2周内使用完毕，以保证其******活性。避免反复冻融完全培养基。

十一、细胞培养操作建议
1.细胞复苏与接种：按照常规细胞复苏方法复苏冻存细胞，用含HELIOS人血小板裂解物-PURE的完全培养基重悬细胞，调整细胞密度后接种于培养器皿中，置于37℃、5% CO?的细胞培养箱中培养。
2.细胞换液：根据细胞生长情况，通常每2-3天更换一次完全培养基。换液时，弃去旧培养基，用PBS或无血清培养基轻轻洗涤细胞1-2次，然后加入新鲜的含HELIOS人血小板裂解物-PURE的完全培养基。
3.细胞传代：当细胞生长至汇合度达到70%-90%时进行传代。弃去旧培养基，用胰蛋白酶或其他合适的消化液消化细胞，终止消化后离心收集细胞，用完全培养基重悬并按适当比例接种到新的培养器皿中。
4.细胞冻存：如需冻存细胞，可使用含HELIOS人血小板裂解物-PURE的冻存液（通常在完全培养基基础上添加10%-20% DMSO），按常规冻存程序进行。

十二、常见问题及解决方案
1.细胞增殖缓慢：
?检查添加比例是否过低，可适当提高HELIOS人血小板裂解物-PURE的浓度。
?确认细胞接种密度是否适宜，调整接种密度。
?检查培养箱温度、CO?浓度、湿度等环境参数是否正常。
?排查基础培养基是否过期或配制不当。
2.细胞形态异常：
?可能是添加比例过高或细胞对产品不适应，可降低添加比例或尝试逐步适应法（如从低浓度开始，逐步提高比例）。?检查是否存在污染，如支原体污染可能导致细胞形态改变。
?确认解冻过程是否规范，避免因反复冻融导致产品活性下降。
3.培养基出现沉淀：
可能是由于低温储存导致部分蛋白析出，可将培养基置于37℃水浴中轻轻摇晃，观察沉淀是否溶解。若溶解，通常不影响使用；若沉淀不溶解，可能是产品质量问题，建议停止使用。
4.批次间差异：
尽管产品经过严格质量控制，但不同批次间仍可能存在细微差异。建议在更换新批次产品时，进行小范围预实验，验证其适用性。

十三、储存与运输
UltraGRO™-PURE在需要之前冷冻储存最稳定。建议储存温度为-20°C。湿冷冻UltraGRO™-使用前将产品置于37°C水浴中纯净。一次UltraGRO™-PURE解冻后，建议当天完全使用完成的培养基制备（例如5%），或将其分成一次性用量，并在-20°C下储存未使用的用量。