PAXgene Blood RNA Kit

用于从PAXgene Blood RNA Tubes中稳定的血液中分离和纯化细胞内RNA

• 用于体外诊断，使用PAXgene Blood RNA Tubes
• 用于收集，稳定和净化的集成系统
• RNA稳定在18-25°C下长达3天
• 在-20°C或-70°C下稳定至少60个月
• 分析前的标准化样品处理

PAXgene Blood RNA系统由用于血液收集，稳定和转运的PAXgene Blood RNA Tubes（可从BD获得，目录号762165）和用于基于硅胶膜的RNA分离和纯化的PAXgene Blood RNA Kit组成。 可以使用微量离心机手动进行纯化，或在QIAcube上自动进行纯化。该系统已获得FDA营销许可，并提供体外诊断用途的 性能规格。

一、性能

PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下稳定细胞内RNA长达3天（或在2-8°C下多5天）。目前可获得的数据显示细胞RNA在-20°C或-70°C下稳定至少60个月。

使用PAXgene Blood RNA System纯化的总RNA是高纯度的，A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之间且≤1.0％（w / w）基因组DNA。当使用多达30％的洗脱液时，至少95％的样品在RT-PCR中。

用PAXgene Blood RNA System和自动化方案纯化的RNA是高纯度的，如缺乏RT-PCR抑制（见上文）和A ₂₆₀ / A ₂₈₀值在1.8和2.2之间所示。通过β-肌动蛋白基因序列的定量实时PCR测量，基因组DNA以≤1％（w / w）存在于≥95％的所有样品中。

使用PAXgene Blood RNA系统进行RNA纯化的自动化方案提供了高度可重复和可重复的RT-PCR结果，使其对临床诊断测试具有高度可靠性。

二、原理

PAXgene Blood RNA Kit用于从PAXgene Blood RNA Tube中收集的2.5 ml人全血中纯化总RNA。该过程很简单，可以使用手动或自动程序进行。

PAXgene Blood RNA Tubes含有基于RNA稳定技术的试剂组合物（美国6,602,718和6,617,170）。该试剂组合物保护RNA分子免受RNase的降解，并使基因表达的离体变化小化。PAXgene Blood RNA Tubes用于收集全血并在18-25°C下稳定细胞内RNA长达3天或在2-8°C下多5天。目前可获得的数据显示细胞RNA在-20℃或-70℃下稳定至少60个月。

三、程序

PAXgene Blood RNA程序很简单，可以使用手动或自动程序进行

1、手动PAXgene血液RNA程序

纯化开始于离心步骤以在PAXgene Blood RNA Tube中沉淀核酸。将沉淀洗涤并重悬浮，并在优化的缓冲液中与蛋白酶K一起孵育以产生蛋白质消化。通过PAXgene Shredder旋转柱进行另外的离心以使细胞裂解物均质化并除去残留的细胞碎片，并将流出级分的上清液转移到新的微量离心管中。加入乙醇以调节结合条件，并将裂解物应用于PAXgene RNA旋转柱。在短暂离心期间，当污染物通过时，RNA选择性地结合到PAXgene二氧化硅膜上。在几个有效的洗涤步骤中除去剩余的污染物。在*和 洗涤步骤之间，用DNase I处理膜以除去痕量的结合DNA。洗涤步骤后，将RNA在洗脱缓冲液中洗脱并加热变性。

2、自动化PAXgene血液RNA程序

在QIAcube上自动化的样品制备遵循与手动程序相同的步骤，使您能够继续使用PAXgene Blood RNA Kit纯化高质量RNA。

自动RNA纯化方案由2部分（或方案），“PAXgene Blood RNA Part A”和“PAXgene Blood RNA Part B”组成，两部分之间有简短的人工干预。

将离心，洗涤和重悬的核酸沉淀从PAXgene Blood RNA Tube转移到处理管中，将其置于QIAcube工作台上的热振荡器单元中。操作员从菜单中选择并启动“PAXgene Blood RNA Part A”协议。QIAcube执行协议的步骤，直至在洗脱缓冲液中洗脱RNA。操作人员将含有纯化RNA的微量离心管转移到QIAcube的热水瓶单元中。操作员从菜单中选择并启动“PAXgene Blood RNA Part B”协议，并通过QIAcube进行热变性。

平均样品制备时间（基于来自12个样品制备的数据）为125分钟，仅有约20分钟的实际操作时间。

四、应用

当该试剂盒与PAXgene Blood RNA Tubes一起使用时，该系统提供来自全血的细胞内RNA用于分子诊断测试中使用的RT-PCR。

PAXgene Blood RNA Kit产品详细信息

50个PAXgene旋转柱，50个PAXgene粉碎机旋转柱，加工管，无RNase DNase I，无RNase试剂和缓冲液。与PAXgene Blood RNA Tubes配合使用

品牌                           货号                                       名称

Qiagen 762164 PAXgene Blood RNA Kit