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为了 限度地减少交叉反应，这些驴抗小鼠 IgG 全抗体已经过亲和纯化，对牛、鸡、山羊、豚鼠、仓鼠、马、人、兔、大鼠和绵羊血清蛋白的交叉反应性最小。交叉吸附或预吸附是提高抗体特异性的纯化步骤，从而提高灵敏度并减少背景染色。二抗溶液通过柱基质，该柱基质含有来自潜在交叉反应物种的固定化血清蛋白。只有非特异性结合的二抗被捕获在色谱柱中，高度特异性的二抗流过。在多重/多色染色实验（例如，流式细胞术）中，这一额外步骤的好处是显而易见的，其中与其他一抗存在潜在的交叉反应性，或在可能存在内源性免疫球蛋白的组织/细胞荧光染色实验中。

Alexa Fluor 染料是当今 信赖的荧光染料之一。Invitrogen™ Alexa Fluor 555 染料是一种明亮的橙色荧光染料，具有激发性，非常适合 555 nm 激光线。为了在成像和流式细胞术中稳定地产生信号，Alexa Fluor 555 染料在较宽的摩尔范围内对 pH 值不敏感。具有高荧光量子产率和高光稳定性的探针可以检测低丰度的生物结构，灵敏度很高。Alexa Fluor 555 染料分子可以以高摩尔比连接到蛋白质上，而不会发生明显的自淬灭，从而实现更亮的偶联物和更灵敏的检测。每个偶联物的标记程度通常为每个IgG分子2-8个荧光团分子;每个产品批次的分析证书上都标明了确切的标签程度。

使用偶联液：使用前将蛋白质偶联液在微量离心机中短暂离心;仅将上清液添加到实验中。此步骤将有助于消除储存过程中可能形成的任何蛋白质聚集体，从而减少非特异性背景染色。由于染色方案因应用而异，因此应根据经验确定抗体的适当稀释度。对于荧光团标记的抗体，1-10 μg/mL 的终浓度对于大多数免疫组织化学和流式细胞术应用来说应该令人满意。

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